探索实验,科普生活(四)
——食品与药学院破茧小队暑期实践队
嗨咯,大家好,欢迎来到本次探索实验,科普生活。上次我们已经将柱层析的定义以及相关知识和大家分享,不知道大家还有没有印象呢。柱层析法其中最重要的即“两相”(固定相和流动相。)可以说它们两个是柱层析法的“灵魂”。了解了柱层析的定义之后,我们今天就来讲讲柱层析的装柱以及上样两方面,一起来看看吧。
首先了解一下它的装柱方法:装柱子(添硅胶)时,有两种方法:即湿法装柱和干法装柱,二者各有优劣。(这里主要以硅胶色谱柱为例。)
1.湿法装柱是先把硅胶用适当的溶剂拌匀后,再填入柱子中,然后再加压用淋洗剂 “走柱子”,本法最大的优点是一般柱子装的比较结实,没有气泡。(操作简单,容错率较高。)
2.干法装柱则是直接往柱子里填入硅胶,然后再轻轻敲打柱子两侧,至硅胶界面不再下降为止,然后再填入硅胶至合适高度,最后再用油泵直接抽,这样就会使得柱子装的很结实。(操作不当容易造成气泡产生,影响实验。)
再来了解一下上样方法:上样也有干法和湿法之分;
1.干法就是把待分离的样品用少量溶剂溶解后,在加入少量硅胶,拌匀后再旋去溶剂。如此得到的粉末再小心加到柱子的顶层。干法上样较麻烦,但可以保证样品层很平整。
2.湿法上样就是用少量溶剂(最好就是展开剂,如果展开剂的溶解度不好,则可以用一极性较大的溶剂,但必须少量)将样品溶解后,再用胶头滴管转移得到的溶液,沿着层析柱内壁均匀加入。然后用少量溶剂洗涤后,再加入。湿法较方便,熟手一般采用此法。
以上即今天的全部内容,总结一下。即柱层析法装柱和上样均有干湿之分,两者均有各自的优点,也有各自的不足:干法操作能让装柱和上样时更加的平整,方便样品的一致移动(呈现一条带,同步落下),但缺点是操作步骤比较繁琐,对操作者要求较高。而湿法则是操作简便,易上手。但所装的柱子以及样品可能不如干法平整。所以,两种方法的采用应根据实际情况合理使用,以更好的完成实验。
好了,今天的探索实验,科普生活就到此结束了,下期我们将继续学习另外一种方法:薄层色谱法。敬请期待。
每日一句:我将永远忠于自己,披星戴月奔向理想和你。
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