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电针促进记忆擦除的分子机制科研实记

来源:山东大学公共卫生学院 作者:王靖宇

为了保证科研进度的进行,我与科创团队的一行人一早来到实验室进行分子实验,确认了MMP9的分泌能够影响到PNN后,我们对实验鼠进行脑部组织蛋白的提取来进行WB实验和qPCR实验。

我们将脑部组织分为两部分加入裂解液进行组织裂解,分别加入trizol试剂和Brain tissue protein extraction kit试剂来进行RNA和蛋白质的提取,在匀质化或溶解样品中,Trizol试剂可保持RNA的完整性,同时能破坏细胞及溶解细胞成分。加入氯仿离心后,裂解液分层成水相和有机相。RNA存在于水相中。水相转移后,RNA通过异丙醇沉淀回收。组织蛋白抽提试剂应用于组织样本的总蛋白提取。提取蛋白之前可根据具体实验需要加入蛋白酶抑制剂。使用该抽提试剂提取的组织蛋白,可进行蛋白活性分析、免疫检测、蛋白纯化等下游操作,并可采用BCA等方法进行蛋白定量。组织蛋白抽提试剂盒中带有蛋白酶抑制剂混合物,可有效避免蛋白提取过程中蛋白的降解。因此我们能够安全有效的保证蛋白质和RNA的提取以及完整性。

实验分为三组,对照组WT鼠、training小鼠以及进行R+E实验的小鼠,我们将通过对小鼠PNN、MMP9的蛋白质含量以及RNA表达量来确定PNN与MMP9之间的关系,我们首先进行了荧光显微镜观察有如下结果

根据荧光的增多可以判断脑区的激活,存在MMP9荧光含量的增加,同时出现了PNN荧光含量的减少,初步判断在电针后由于MMP9的RNA表达量增加使得MMP9蛋白含量增加,抑制PNN的合成同时降解PNN蛋白。

我们将上样后的样品板放入电泳仪中进行电泳,方便我们对蛋白质进行筛选,在完成转膜、染色和显色等流程后,我们得到了我们的目的条带,三组样品中training组小鼠的PNN蛋白量要多于其他两组,而R+E实验组小鼠的MMP9的表达量要高于其他两组,因此可以判断MMP9的升高会引起PNN蛋白的减少,因为MMP9是蛋白酶,因而判断在电针处理后MMP9表达量上升,降解PNN蛋白。

同时我们得到了qPCR的结果,PCR仪显示在进行电针处理后MMP9的RNA含量有所上升,PNNRNA的含量下降,说明在电针后MMP9的表达增多,PNN的表达减少。

经过一天的实验,我们的课题进度又有所前进,这对于我们来说应该是最好的奖励吧,希望明天的工作会更好。

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